在現在的科研研究中,最初的研究基本上就是高通量篩選對照組和實驗組的差異表達基因,然后進行大樣本的熒光定量PCR驗證,確定差異基因與某種疾病的相關性。在之后的研究中,我們就要針對差異基因進行干擾或過表達來進行細胞功能實驗。其中通過T劃痕實驗進行細胞侵襲、遷移的檢測是比較重要的方法。
細胞劃痕是一種簡單易行的檢測細胞運動的方法,實驗成本低,可以用來檢測貼壁生長腫瘤細胞的侵襲轉移能力。
細胞劃痕內容:
材料:6 孔板(其他的也可以,但感覺6孔比較好,大小適中)、marker筆直尺、20微升槍頭(滅菌)、無血清培養(yǎng)基、PBS
步驟:所有能滅菌的器械都要滅菌,直尺和marker筆在操作前紫外照射30min(超凈臺內)
1.先用marker筆在6孔板背后,用直尺比著,均勻得劃橫線,大約每隔0.5~1cm一道,橫穿過孔。每孔至少穿過5條線。
2.在空中加入約5X105個細胞,具體數量因細胞不同而不同,掌握為過夜能鋪滿。
3.第二天用槍頭比著直尺,盡量垂至于背后的橫線劃痕,槍頭要垂直,不能傾斜。
4.用PBS洗細胞3次,去處劃下的細胞,加入無血清培養(yǎng)基。
5.放入37度5%co2培養(yǎng)箱,培養(yǎng)。按0,6,12,24小時取樣,拍照。
細胞劃痕注意事項:
一般做劃痕實驗,都是在無血清或者底血清狀態(tài)下培養(yǎng)的,否則細胞增殖就不能忽略。
按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕,可以形成若干交叉點,作為固定的檢測點,這就解決了前后觀察時位置不固定的問題。